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實(shí)驗室細胞培養板如何選擇!
細胞培養板依底部形狀的不同可分為平底和圓底(U型和V型);培養孔的孔數有6、12、24、48、96、384、1536 孔等;根據材質(zhì)的不同有Terasaki板和普通細胞培養板。具體選擇時(shí)根據培養細胞的類(lèi)型、所需培養體積及不同的實(shí)驗目的而定。
(一)平底和圓底(U型和V型)培養板的區別和選擇：
貼壁細胞一般用平底培養板。懸浮型細胞的培養一般用V型。
U型培養板亦多用于培養懸浮型細胞 。V型培養板有時(shí)用做免疫學(xué)血凝集的實(shí)驗。
細胞培養板主要是PS材料。材料是treated sufface。便于細胞貼壁生長(cháng)與伸展。當然還有浮游細胞的生長(cháng)材料，同時(shí)還有low binding surface，有關(guān)更多實(shí)驗材料上的應用與對材料的選擇。
問(wèn)：我想測吸光度用酶標儀，用多孔細胞培養板行嗎?請問(wèn)酶標板 多孔細胞培養板有什么區別?
答：用多空細胞培養板測吸光度肯定可以拉，我們經(jīng)常用它來(lái)做樣品的蛋白定量和MTT檢測。
區別：酶標板一般要比細胞培養板貴，細胞板主要做細胞培養，但也可以用來(lái)測蛋白濃度;酶標板包括包被板和反應板，一般不能用做細胞培養，它主要做免疫酶聯(lián)反應后的蛋白檢測，它需要更高的要求還需要特定的酶標工作液。如下是個(gè)用酶標板檢測冠狀病毒IgM/IgG抗體例子：見(jiàn)網(wǎng)站
常用不同培養板的孔底面積及推薦加液量：不同孔板所加培養液的液面都不宜太深，一般在2-3mm范圍，結合不同孔的底面積就可算出各培養孔的適宜加液量。若加液量過(guò)多會(huì )影響氣體(氧氣)交換，而且在搬動(dòng)過(guò)程中易溢出造成污染。具體所加細胞密度依實(shí)驗的目的不同靈活掌握。
培養器皿 面積(cm2)培養液量(ml) 細胞量
96 孔培養板 0.32 0.1 10e5
24孔培養板 2 1.0 5×10e5
12孔培養板 4.5 2.0 10e6
6孔培養板 9.6 2.5 2.5×10e6
3.5 cm 培養皿 8 3.0 2×10e6
6 cm 培養皿 21 5.0 5.2×10e6
10 cm 培養皿 55 10.0 13.7×10e6
25cm2 培養瓶 25 5.0 5×10e6
75cm2 培養瓶 75 15～30 2×10e7
(一)細胞培養板的密閉和污染問(wèn)題：
細胞培養板的加樣和操作：細胞培養板在進(jìn)行細胞操作時(shí)同樣遵循嚴格無(wú)菌的原則，各項操作要保證規范、科學(xué)，不對細胞的生長(cháng)造成額外的影響。這其中最常見(jiàn)的問(wèn)題就是如何保證加樣后細胞的均勻和盡量減少換液對細胞生長(cháng)狀態(tài)的影響。
問(wèn)：96，24孔培養板或培養皿的蓋子都很松，這樣是方便了透氣，但是細菌、霉菌等污染物會(huì )不會(huì )也隨著(zhù)溜進(jìn)去呢?
答：1.蓋子很松，屬于半開(kāi)放培養，這樣的目的是透氣(實(shí)際上是為了使培養皿外的co2能夠與培養皿充分交換，維持培養基的pH值)。
2.凡事有利必有弊，這樣當然增加了污染的可能性。此外這樣還會(huì )使培養皿內的液體蒸發(fā)，這對于精確定量的藥物來(lái)說(shuō)就顯得值得注意了。所以以下二條措施是必須的a培養箱內空氣必須清潔(定期紫外線(xiàn)照，酒精擦洗，盡量少開(kāi)關(guān)培養箱)b培養箱內的濕度必須始終保持為*(培養箱內放置無(wú)菌蒸餾水的水槽)。
(二)細胞分布不均及解決辦法：
問(wèn)：我的細胞接種培養板，細胞總是聚集在周邊部分，該如何處理啊?我看園子里有的戰友的細胞卻是聚集在中間，是不是板子的質(zhì)量問(wèn)題啊?
答：請問(wèn)你的細胞是如何混勻的?是滴管吹打還是振蕩培養板?如果是后者，而且是轉圈搖勻的話(huà)，很有可能由于離心力的作用使細胞甩到周邊部分，導致細胞中間少，四周多!自己可是試試!
周邊一般是相對會(huì )多一點(diǎn)，但是中間的數量也不會(huì )很少啊~~ 鋪板的時(shí)候我也沒(méi)有特異去振蕩培養板。
(三)6孔板接種和換液：
問(wèn)：我的細胞傳代很正常，但一種到六孔板里(不管加藥和對照)，總有兩三個(gè)孔(隨機)細胞長(cháng)得不好，很小，像破碎了。有人遇到過(guò)這種情況嗎?到底是啥原因呢?請各位指點(diǎn)
答：可能跟你加液的溫度有關(guān)。如果你細胞剛剛拿出來(lái)?yè)Q液加液，培養基也是從4度冰箱拿出來(lái)不久，很容易細胞就會(huì )凍死了。建議你最好把培養基先在培養箱里邊孵育15min先。
(四)24孔板接種：
問(wèn)：我把細胞消化接種到24孔板之后，已經(jīng)四天了，老是每孔的中間部分長(cháng)不滿(mǎn)，每天換液時(shí)都用PBS 清洗，第二天換液時(shí)都出現同樣的情況，每孔的邊緣長(cháng)的很好，中央大量死細胞，是什么原因!
答：是中央長(cháng)不滿(mǎn)，還是中央有和邊緣相同密度的細胞，但是大部分都是死細胞?如果是前者，也許不是技術(shù)問(wèn)題，而是物理問(wèn)題了。
我是選擇孔內鋪蓋玻片，在玻片上種植。每次換液都用PBS洗，必要的步驟嗎?另外，也有可能和細胞種類(lèi)有關(guān)或者和培養液有關(guān)?
我想你的培養液可能加的太少了。由于表面張力的作用，培養板的邊緣液體會(huì )向上走，造成培養液面呈現一個(gè)凹面(就像量筒的液體凹面一樣)，中央的細胞正好在凹面的處，培養液少，細胞的營(yíng)養不夠，甚至干涸掉，空氣中的氧氣也會(huì )造成損傷，即使有增值過(guò)來(lái)的細胞也會(huì )死掉。
經(jīng)驗：
1.所有待接種的細胞懸液在種板前一定要用吸管混勻。
2.按資料記載，24孔板的液體量為1ml，個(gè)人也覺(jué)得1ml的量足矣。
3.接種時(shí)，要慢慢加樣，且記得輕微旋轉槍頭，這樣做對細胞均勻分布有一定效果。
4.接種后最好直接放入培養箱讓細胞適應培養板這個(gè)新的環(huán)境，個(gè)人認為沒(méi)有必要在室溫放置一段時(shí)間。
5.根據細胞的特性，細胞均喜歡聚集在邊緣生長(cháng)，所以我考慮到，你的問(wèn)題還有可能是接種時(shí)的細胞密度不夠，導致周邊密集，中間稀疏的錯覺(jué)。你的拌種密度是多少?
另"要慢慢加樣，且記得輕微旋轉槍頭"的意思就是:加樣不能太快，避免細胞在一個(gè)加樣處聚集，且注意在不同的部位進(jìn)行加樣，即邊加邊活動(dòng)槍頭，人為使細胞趨于均勻分布，我個(gè)人覺(jué)得有一定的效果，不知這次我解釋清楚沒(méi)有。
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