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　　熒光定量PCR耗材的使用和選擇注意事項

　　PCR板

　　PCR板是一種在聚合酶鏈式反應(Polymerase Chain Reaction ,PCR)中主要作為參與擴增反應的引物、Taq DNA聚合酶、dNTP、模板核酸、Mg、緩沖液等的承載物。

　　PCR板材質(zhì)

　　其本身材質(zhì)在當今主要以聚丙烯(PP)為主，能更好適應PCR反應過(guò)程中反復高低溫設定，并且能夠實(shí)現高溫高壓滅菌操作。為配合排槍、PCR儀等實(shí)現高通量操作，較常使用的為96孔或384孔的PCR板。板型符合SBS國際標準，且為適應不同廠(chǎng)家的PCR儀，根據裙邊設計又可分為無(wú)裙邊、半裙邊、升裙邊和全裙邊四種設計模式。

　　PCR板常見(jiàn)顏色

　　有透明和白色，其中白色更適合用于新型的實(shí)時(shí)熒光定量PCR。

　　PCR板用途

　　廣泛應用于遺傳、生化、免疫、醫藥等領(lǐng)域，不僅應用于基因分離、克隆和核酸序列分析等基礎研究，還可用于疾病的診斷或任何有DNA，RNA的地方，屬于實(shí)驗室一次性易耗品。

　　如何正確使用96孔PCR孔板

　　PCR板有透明和乳白色可選，其中乳白色更適合用于頂部采集熒光信號的新型熒光定量PCR儀(如伯樂(lè )CFX系列，ABI 7500fast 以上型號， Roche 480系列)，但如果熒光定量PCR儀是底部光源的，則應選擇透明的。

　　PCR板根據裙邊設計又可分為無(wú)裙邊、半裙邊和全裙邊三種設計模式，不同廠(chǎng)家的熒光定量PCR儀會(huì )設計不同的切角或邊緣凸起，請選擇適合該PCR儀的板子。

　　PCR板又分100ul體積(矮板)和200ul體積(高板)，根據機型的不同選擇，選擇不同高度孔板，避免高度錯誤對機器造成破壞和加熱不均導致數據失真。

　　當使用96孔板做熒光定量PCR實(shí)驗的時(shí)候，推薦使用光學(xué)膜代來(lái)密封反應孔。正確的封膜方法是：先沿著(zhù)96孔板的縱向壓膜，然后橫向，最后沿著(zhù)板的邊緣按壓使之密封。具體手法見(jiàn)下面圖示：

　　加樣后會(huì )在管壁上飛濺一些小液滴，另外反應體系內也會(huì )有一些氣泡，需要離心去掉掛壁液滴和氣泡。請使用專(zhuān)用的微孔板離心機解決上述問(wèn)題。

　　PCR板屬于一次性消耗品，生產(chǎn)一次成型，不建議剪開(kāi)使用容易造成實(shí)驗誤差增加，不能清洗或部分重復利用。不要為了節省一點(diǎn)小錢(qián)，而給實(shí)驗帶來(lái)后續分析上的困擾。

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