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豬ELISA試劑盒的保溫溫度
豬ELISA試劑盒加標本一般用微量加樣器,按規定的量加入板孔中。每次加標本應更換吸嘴,以免發(fā)生交叉污染,也可用一次性的定量塑料管加樣(一般不建議使用)。有些指標檢測(如間接法ELISA試劑盒)需用稀釋的血清,可在試管中按規定的稀釋度稀釋后再加樣。也可在板孔中加入稀釋液,再在其中加入血清標本,然后在微型震蕩器上震蕩1min。加酶結合物工作液和底物工作液時(shí)可用多道移液器,使加液過(guò)程在短時(shí)間內完成。
溫育常采用的溫度有43℃、37℃、室溫和4℃(冰箱溫度)等。37℃是實(shí)驗室中常用的保溫溫度,也是大多數抗原抗體結合的合適溫度。在建立ELISA試劑盒方法作反應動(dòng)力學(xué)研究時(shí),兩次抗原抗體反應一般在37℃經(jīng)1-2小時(shí),產(chǎn)物的生成可達。為加速反應,可提高反應的溫度,有些試驗在43℃進(jìn)行,但不宜采用更高的溫度??乖贵w反應4℃更為*,在放射免疫測定中多使反應在冰箱中過(guò)夜,以形成的沉淀。但因所需時(shí)間太長(cháng),在ELISA試劑盒中一般不予采用。
保溫的方式除有的ELISA儀器附有特制的電熱塊外,一般均采用水浴,可將豬ELISA試劑盒板置于水浴箱中,ELISA試劑盒板底應貼著(zhù)水面,使溫度迅速平衡。為避免蒸發(fā),板上應加蓋,也可用塑料貼封紙或保鮮膜覆蓋板孔,此時(shí)可讓反應板漂浮在水面上。若用保溫箱,ELISA試劑盒板應放在濕盒內,濕盒要選用傳熱性良好的材料如金屬等,在盒底墊濕的紗布,將ELISA試劑盒板放在濕紗布上。濕盒應先放在保溫箱中預溫至規定的溫度,特別是在氣溫較低的時(shí)候更應如此。為避免酶標板底部受水汽或磨損導致的讀數誤差,一般采用鼓風(fēng)恒溫箱保溫,這個(gè)過(guò)程必須在酶標板上方貼封紙,以免蒸發(fā)。無(wú)論是水浴還是濕盒溫育,反應板均不宜疊放,以保證各板的溫度都能迅速平衡。室溫溫育的反應,操作時(shí)的室溫應嚴格限制在規定的范圍內,標準室溫溫度是指20-25℃,但具體操作時(shí)可根據說(shuō)明書(shū)的要求控制溫育。室溫溫育時(shí),ELISA試劑盒板只要平置于操作臺上即可。溫度和時(shí)間應按規定力求準確。
豬ELISA試劑盒屬固相免疫測定,抗原、抗體的結合只在固相表面上發(fā)生。以抗體包被的夾心法為例,加入板孔中的標本,其中的抗原并不是都有均等的和固相抗結合的機會(huì ),只有貼近孔壁的一層溶液中的抗原直接與抗體接觸。這是一個(gè)逐步平衡的過(guò)程,因此需經(jīng)擴散才能達到反應的終點(diǎn)。在其后加入的酶標記抗體與固相抗原的結合也同樣如此。這就是為什么ELISA試劑盒反應總是需要一定時(shí)間的溫育。
注:以上資料僅供參考!
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