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　　PCR，qPCR，dPCR分別是什么?有什么區別?

　　PCR，qPCR，dPCR分別是什么嗎?這些東西，在生物行業(yè)里見(jiàn)的比較多，我們生物行業(yè)的從業(yè)人員懂得應該多一些。PCR技術(shù)，在二十世紀八十年代被發(fā)明?，F在DNA擴增已成為生物學(xué)研究的基礎。96孔板供應天津本生告訴大家，在過(guò)去的三十年中，這項經(jīng)典技術(shù)已得到不斷改進(jìn)，以解決研究中的新問(wèn)題和新需求。從經(jīng)典PCR，實(shí)時(shí)定量PCR到當前的數字PCR，PCR技術(shù)在不斷變化，但從未消失。如今，PCR技術(shù)已經(jīng)從實(shí)驗室中分離出來(lái)，在遺傳鑒定和疾病診斷中發(fā)揮了巨大作用，并且在日益廣闊的領(lǐng)域中具有新的生命力。

　　PCR方法:

　　PCR的原理在這里不需要進(jìn)一步解釋。多年來(lái)，研究人員基于此開(kāi)發(fā)了一系列衍生技術(shù)。當前的PCR方法可分為三類(lèi)：終點(diǎn)PCR，qPCR和dPCR。

　　終點(diǎn)PCR:

　　端點(diǎn)PCR是原始，簡(jiǎn)單的PCR方法，并且今天仍然被廣泛使用。 PCR反應完成后，用戶(hù)只能通過(guò)凝膠電泳，毛細管電泳等方法檢測產(chǎn)物。終點(diǎn)PCR本身無(wú)法量化，因為反應產(chǎn)生的DNA數量可能無(wú)法反映初始情況。例如，不同樣品和序列之間的擴增效率存在差異。

　　qPCR和dPCR:

　　研究人員已經(jīng)通過(guò)兩種方式克服了定量PCR分析的挑戰：實(shí)時(shí)定量PCR(qPCR)和數字PCR(dPCR)。 qPCR主要使用插入染料或熒光探針(例如TaqMan)。通過(guò)監測PCR期間的熒光強度，可以比較多個(gè)樣品的DNA水平。數字PCR(dPCR)的基本工作原理很簡(jiǎn)單。先將樣品分為多個(gè)PCR反應，每個(gè)反應多包含一個(gè)模板。然后通過(guò)對陽(yáng)性和陰性反應進(jìn)行計數來(lái)確定初始樣品中模板分子的數量。

　　盡管qPCR和dPCR都能夠定量樣品中的核酸，但它們有一個(gè)重要的區別。 qPCR只能實(shí)現相對定量(例如，樣品A的目標序列是樣品B的目標序列的兩倍)，除非使用此標準生成標準曲線(xiàn)。數字PCR本身是絕對定量的，不需要標準曲線(xiàn)。另一方面，qPCR技術(shù)更加成熟，市場(chǎng)上有大量商業(yè)產(chǎn)品可供選擇。 dPCR仍然是小的新鮮肉。它不如qPCR廣泛使用且價(jià)格昂貴。與dPCR相比，qPCR更適合于高通量分析，并且動(dòng)態(tài)范圍廣。

　　DPCR通常更準確。 qPCR可以輕松區分兩倍的濃度差異(例如5個(gè)拷貝和10個(gè)拷貝)，但是面對小的差異，它卻較弱。 dPCR理論上可以識別相差少于20%的拷貝數，例如5和6拷貝。該準確度對于量化涉及染色體重排的基因的拷貝數或量化癌癥患者血液中的循環(huán)生物學(xué)指標特別有用。由于dPCR相當于在反應結束時(shí)稀釋樣品并讀取數據，因此dPCR比qPCR對抑制劑的抵抗力更高。

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