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問(wèn)題分析：超濾離心管常見(jiàn)問(wèn)題
結果分析：
1. 蛋白在濃縮時(shí)出現了沉淀為什么?
蛋白如果濃縮過(guò)快或者過(guò)度濃縮都有可能引起蛋白沉淀。建議蛋白濃縮后的最終濃度不超過(guò)20mg/ml. 對于對濃縮速度敏感而容易沉淀的蛋白，建議的改進(jìn)方法是：
1)離心力降為推薦離心力的30%-50%。
2)改選擇下一級過(guò)濾裝置(如原本選用10K，此時(shí)可以選擇30K)
3)在濃縮過(guò)程中，取出超濾管，用槍頭反復吹吸幾次。
2. 濃縮后發(fā)現濃縮液中沒(méi)有目的蛋白，可能的原因是?
首先，超濾管的起始蛋白濃度為25ug/ml.
請確保樣本的起始濃度大于這個(gè)濃度。
其次，如果問(wèn)題仍然出現。
請不要丟棄您的樣本濾過(guò)液，
以做下一步分析：
1)如果樣本在濾過(guò)液中，那么請排查：
a) 是否選擇了合適截留分子量的超濾管(目的蛋白分子量的1/2或者1/3)?
b) 使用的離心力是否是在最高范圍內?如果使用的是rpm，請換算成相應的g離心，
c) 離心機最近是否有校準過(guò)?
d) 是否嘗試這個(gè)蛋白?如果能確保用同樣的超濾管對其他蛋白成功操作的話(huà)， 那么有可能是目的蛋白的原因。有時(shí)蛋白會(huì )因其本身的一些特性(構象差異)而影響濃縮效果，建議選用上一分子量級別的超濾管(如原本選用30K，此時(shí)可以選擇 10K)。
2)如果樣本也不在濾過(guò)液中：
a) 樣本起始蛋白濃度是否大于25ug/ml?
b) 用來(lái)確定樣本濃度的方法是什么?是否可信?
c) 目的蛋白是不是沉淀了?如果是，具體解決方法請參考上面的關(guān)于蛋白沉淀的相關(guān)解決方法。
3.用濃縮后的蛋白做下游分析時(shí)發(fā)現有干擾，可能原因?
裝置的超過(guò)濾薄膜含有微量甘油。如果此材料干擾分析，可用緩沖液或超純水預清洗。如果干擾仍然存在，用0.1 N NaOH清洗，然后用緩沖液或Milli-Q® 水再次清洗后甩干。
4. 有時(shí)候用超濾離心管連水都離不下來(lái)，可能原因?
裝置的超過(guò)濾薄膜含有微量甘油。如果出現這種情況，先用0.1 N NaOH清洗再離心。最后用緩沖液或Milli-Q®水再次清洗后甩干。清洗后的濾膜應立即使用， 如暫時(shí)不用，請保持潤濕狀態(tài)，避免重新干燥。
5.使用超濾管對蛋白進(jìn)行濃縮的過(guò)程中懷疑目的蛋白和膜之間可能存在非特異性吸附，如何改善這一現象?
超濾管使用的是再生纖維素膜的材質(zhì)，擁有極低的蛋白吸附能力。但是對于一些疏水性蛋白或非極性蛋白，它們和膜的非特異吸附可能會(huì )增強，對于這種情況，客戶(hù)可以嘗試在實(shí)驗前對超濾管進(jìn)行封閉處理，詳細步驟可聯(lián)系廠(chǎng)家技術(shù)支持。
同時(shí)也可建議換成Amicon Ultra 0.5來(lái)進(jìn)行實(shí)驗，通過(guò)減小膜面積來(lái)降低非特異性吸附。
超濾離心管 本生一直視質(zhì)量控制為企業(yè)的生命，追求企業(yè)競爭力的不斷提升。公司在經(jīng)營(yíng)中始終秉承：遵紀守法，嚴于律己，寬仁以待，敢于承擔的企業(yè)精神作為標準，以過(guò)硬的質(zhì)量和優(yōu)良的服務(wù)來(lái)維護和拓展市場(chǎng)，較大限度的滿(mǎn)足客戶(hù)的需求。與客戶(hù)的共贏(yíng)，是我們的發(fā)展目標。本生!您信任的合作伙伴。我們愿與您真誠合作，共創(chuàng )美好的未來(lái)。本生離心管
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