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　　本生快訊：ELISA原理和具體試驗方法以及結果處理?

　　ELISA檢測試劑盒應用定性?shī)A心免疫檢測技術(shù)，用合成的HEV多肽抗原包被微孔板板條，這些多肽是中國型HEV毒株核心氨基酸序列中抗原性很強的肽段，分別來(lái)自于該毒株的開(kāi)放閱讀框2和開(kāi)放閱讀框3。將樣品或標準品加入孔中并孵育，如果其中存在HEV IgM抗體，這些抗體就會(huì )與HEV 的多肽抗原結合，并固定在上面，洗板除去其它非特異性抗體和樣品中的其它成份。然后加入羊抗人IgM-HRP(辣根過(guò)氧化物酶)酶結合物，經(jīng)第二次孵育后，酶結合物就會(huì )與第一次孵育結合上的HEV IgM抗體相結合，洗板除去未結合的酶結合物，加入TMB底物溶液，在第三次孵育時(shí)會(huì )發(fā)生酶-底物反應，只有那些含有HEV IgM抗體和酶結合物所形成的復合物的孔才會(huì )發(fā)生顏色變化，加入硫酸溶液終止酶和底物間的反應，并在波長(cháng): 450nm處測量O.D.值,按照本HEV IgM抗體elisa試劑盒 的測試標準, O.D.值大于或等于Cut-Off值的樣品被認為是初試陽(yáng)性操作步驟：

　　1. 使用前，將所有試劑充分混勻。不要使液體產(chǎn)生大量的泡沫，以免加樣時(shí)加入大量的氣泡，產(chǎn)生加樣上的誤差。

　　2. 根據待測樣品數量加上標準品的數量決定所需的板條數。每個(gè)標準品和空白孔建議做復孔。每個(gè)樣品根據自己的數量來(lái)定，能使用復孔的盡量做復孔。

　　3. 加入稀釋好后的標準品50ul于反應孔、加入待測樣品50ul于反應孔內。立即加入50ul的生物素標記的抗體。蓋上膜板，輕輕振蕩混勻，37℃溫育45分鐘。

　　4. 甩去孔內液體，每孔加滿(mǎn)洗滌液，振蕩30秒，甩去洗滌液，用吸水紙拍干。重復此操作4次。如果用洗板機洗滌，洗滌次數增加一次。

　　5. 每孔加入100ul的親和鏈酶素-HRP，輕輕振蕩混勻，37℃溫育30分鐘。

　　6. 甩去孔內液體，每孔加滿(mǎn)洗滌液，振蕩30秒，甩去洗滌液，用吸水紙拍干。重復此操作4次。如果用洗板機洗滌，洗滌次數增加一次。

　　7. 每孔加入底物A、B各50ul，輕輕振蕩混勻，37℃溫育5分鐘。避免光照。

　　8. 取出酶標板，迅速加入50ul終止液，加入終止液后應立即測定結果。

　　9. 在450nm波長(cháng)處測定各孔的OD值。

　　ELISA試劑盒結 果 判 斷 與 分 析：

　　1、 儀器值：于波長(cháng)450nm的酶標儀上讀取各孔的OD值

　　2、 以吸光度OD值為縱坐標(Y)，相應的S-100B標準品濃度為橫坐標(X)，做得相應的曲線(xiàn)，樣品的S-100B含量可根據其OD值由標準曲線(xiàn)換算出相應的濃度，再乘以稀釋倍數;或用標準物的濃度與OD值計算出標準曲線(xiàn)的回歸方程式，將樣品的OD值代入方程式，計算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數，即為樣品的實(shí)際濃度。

　　3、 檢測值范圍： 0-200ng/ml

　　4、 敏感度：1.0ng/ml

　　ELISA試劑盒 本生一直視質(zhì)量控制為企業(yè)的生命，追求企業(yè)競爭力的不斷提升。公司在經(jīng)營(yíng)中始終秉承：遵紀守法，嚴于律己，寬仁以待，敢于承擔的企業(yè)精神作為標準，以過(guò)硬的質(zhì)量和優(yōu)良的服務(wù)來(lái)維護和拓展市場(chǎng)，較大限度的滿(mǎn)足客戶(hù)的需求。與客戶(hù)的共贏(yíng)，是我們的發(fā)展目標。本生!您信任的合作伙伴。我們愿與您真誠合作，共創(chuàng )美好的未來(lái)