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　　本生解析：操作細胞系步驟以及小技巧

　　脂質(zhì)體作為體內和體外輸送載體的工具，已經(jīng)研究的十分廣泛，中性脂質(zhì)體是利用脂質(zhì)膜包裹DNA，借助脂質(zhì)膜將DNA導入細胞膜內。帶正電的陽(yáng)離子脂質(zhì)體，DNA并沒(méi)有預先包埋在脂質(zhì)體中，而是帶負電的DNA自動(dòng)結合到帶正電的脂質(zhì)體上，形成DNA-陽(yáng)離子脂質(zhì)體復合物，從而吸附到帶負電的細胞膜表面，經(jīng)過(guò)內吞被導入細胞。

　　一、細胞系方法原理

　　細胞系方法主要包括：電穿孔法、磷酸鈣沉淀法、脂質(zhì)體轉染法、病毒介導的轉染等，理想的細胞轉染方法是具有高轉染效率、對細胞的毒性作用小等，本文主要介紹細胞轉染常用的方法-脂質(zhì)體轉染的原理和操作步驟等。

　　優(yōu)點(diǎn): 與其它方法相比，有較高的效率和較好的重復性，它適用于把DNA轉染入懸浮或貼壁培養細胞中，是目前條件下蕞方便的轉染方法之一。

　　二、細胞系操作步驟

　　(1) 細胞系培養：取6cm細胞皿，向每孔中加入2mL含1~2×105個(gè)細胞培養液，37℃ CO2培養密度至40%~60%，密度過(guò)大，轉染后不利篩選細胞。

　　(2) 轉染液制備：在EP管中制備以下兩液(為轉染每一個(gè)孔細胞所用的量)

　　A液：用不含血清培養基稀釋1ug 質(zhì)粒DNA。

　　B液：用不含血清培養基稀釋2ul脂質(zhì)體。

　　分別將A液與B液輕彈混勻，靜置5分鐘。

　　(3) 吸取B液加入至A液中，輕彈混勻。室溫中置10-15分鐘。

　　(4) 轉染準備：用1mL不含血清培養液漂洗兩次，再加入4mL不含血清培養液。

　　(5) 轉染：把A/B復合物緩緩加入培養液中，搖勻，37℃溫箱置6~24小時(shí)，吸除無(wú)血清轉染液，換入正常培養液繼續培養。

　　(6) 瞬時(shí)轉染后，可在48h-72h細胞長(cháng)滿(mǎn)之后，提取細胞蛋白或者RNA，驗證敲減/過(guò)表達效率。

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