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　　熒光定量PCR管的實(shí)驗原理：
 

　　實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈反應(PCR)是指同時(shí)監測PCR過(guò)程的能力。因此，可以在PCR擴增過(guò)程中收集數據，而不是在PCR后。這給基于PCR的DNA和RNA定量方法帶來(lái)了革命性的變化。在實(shí)時(shí)熒光定量PCR(qPCR)中，反應的特征是在循環(huán)中檢測到目標擴增的時(shí)間點(diǎn)，而不是在一定循環(huán)數后目標分子的累積擴增量。目標核酸的初始拷貝數越高，熒光顯著(zhù)增加的速度越快。相反，終點(diǎn)試驗(也稱(chēng)為“讀數板試驗”)測量PCR循環(huán)結束時(shí)PCR產(chǎn)物的累積量。
 

　　熒光定量PCR管的操作使用：
 

　　1、樣品制備
 

　　根據實(shí)驗需要，向cDNA模板中加水進(jìn)行適當稀釋?zhuān)瑴u旋混合和離心，根據檢測到的樣本和基因的實(shí)際數量計算樣本添加系統，根據系統添加ddH2O、qPCRmix、引物，制備一管混合、渦旋混合、離心。準備適量的qPCR八排板或96孔板。在這里，我們使用八排試管，將它們放在冰上進(jìn)行操作，然后將上一步中混合的混合物壓至19μL，每孔添加一μL到八排孔中。
 

　　2、增加模板
 

　　向每個(gè)孔添加1μLcDNA模板。添加樣品后，蓋住八排管蓋，并嘗試從孔邊緣壓縮管蓋。渦流混合和離心以去除氣泡。
 

　　3、計算機響應
 

　　操作機器前的程序設置如下：設置反應溫度，設置孔板信息，將樣品放入儀器，開(kāi)始反應。
 

　　4、導出數據
 

　　反應后，獲得qPCR數據。根據溶解曲線(xiàn)，檢查數據的有效性，將數據導出為Excel文件并保存。
 

　　5、實(shí)驗結束
 

　　實(shí)驗結束后，打開(kāi)qPCR儀器，取出8根相連的試管，蓋上qPCR儀器并關(guān)閉計算機和儀器。