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　　PCR/qPCR耗材選擇的幾個(gè)主要因素!

　　1.塑料耗材組成：

　　材料

　　PCR/qPCR耗材通常由聚丙烯制成，因為它是惰性的并且能夠承受熱循環(huán)過(guò)程中溫度的快速變化。 聚丙烯的惰性性質(zhì)使其對于反應物質(zhì)的吸收降低至最小，確保獲取最佳的PCR結果。為了進(jìn)一步保障在純度和生物兼容性方面的批次間一致性，應當在生產(chǎn)過(guò)程中使用全新未循環(huán)使用的醫學(xué)級或分子生物學(xué)級高品質(zhì)聚丙烯原料。請注意，某些PCR / qPCR板邊框用更強的聚碳酸酯制成，以與高通量機器人應用兼容。

　　顏色

　　PCR管和板通?？商峁┒喾N不同的顏色形式，以便于對于樣品的視覺(jué)區分和鑒別，特別是在高通量實(shí)驗中。盡管塑料的顏色對DNA擴增沒(méi)有影響，但在設置實(shí)時(shí)PCR或qPCR的反應時(shí)，與透明耗材相比，我們更推薦使用白色塑料或磨砂耗材，以實(shí)現靈敏和準確的熒光檢測(圖43)。

　　白色耗材通過(guò)阻止熒光折射出管來(lái)提高qPCR數據的靈敏度和一致性。折射被最小化時(shí)，更多的信號被反射回檢測器，從而增加信噪比。此外，白色管壁可阻止熒光信號傳遞至PCR儀模塊，避免被吸收或不一致地反射熒光信號，從而使重復實(shí)驗中的差異降至。由于每個(gè)品牌儀器的設計不同，請遵循廠(chǎng)家建議以獲得最佳性能。比如，對于Bio-Rad和Roche品牌的定量?jì)x器，推薦使用白色耗材用于qPCR。而對于A(yíng)pplied Biosystems熒光定量PCR儀，推薦使用磨砂孔耗材。

　　PCR/qPCR塑料耗材要點(diǎn)：

　　PCR/qPCR塑料耗材可提供多種規格和形式。了解他們相應的特點(diǎn)和相關(guān)術(shù)語(yǔ)將會(huì )幫助您在使用這些塑料耗材時(shí)獲得最佳的PCR和qPCR結果。

　　一般屬性

　　反應規?；蚣訕芋w積

　　PCR/qPCR塑料耗材的加樣體積決定了可成功進(jìn)行的PCR/qPCR反應的規模(體積)。過(guò)量的加樣將會(huì )導致熱傳導的效率下降，溢出以及交叉污染。另一方面，加樣不足則會(huì )導致樣品因蒸發(fā)而損耗。加熱模塊也決定了可使用的塑料耗材尺寸以及它們對于完整而有效熱傳導的最佳適配性。PCR/qPCR耗材的最常見(jiàn)體積規格為：

　　管：0.5 mL, 0.2 mL, 0.1 mL

　　96 孔板：0.2 mL, 0.1 mL

　　384 孔板：0.02 mL

　　裙邊：

　　PCR / qPCR板的“裙"是板周?chē)陌?。裙邊可為反應體系構建時(shí)的移液過(guò)程提供較好的穩定性，以及在進(jìn)行自動(dòng)機械處理時(shí)提供更好的機械強度。PCR / qPCR平板可分為無(wú)裙邊，半裙邊和全裙邊。

　　無(wú)裙邊板缺少周?chē)拿姘?。這種形式的反應板可與絕大多數PCR儀和實(shí)時(shí)PCR儀的模塊適配，但不適用于自動(dòng)化應用。

　　半裙邊板在板的邊緣周?chē)哂卸痰倪吘?在移液過(guò)程中提供足夠的支撐并且為機器人處理提供機械強度。

　　全裙邊的 PCR / qPCR板具有覆蓋板高度的邊緣面板.這種板形式適用于具有突出模塊的PCR儀(可有利于自動(dòng)化操作)，可安全穩固適配。