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細胞培養的步驟及其注意事項!
更新時(shí)間:2022-03-02瀏覽:1734次

  細胞培養的步驟及注意事項


  一、 復蘇

  1. 把凍存管從液氮中取出來(lái),立即投入37℃水浴鍋中,輕微搖動(dòng)。液體都融化后(大概1-1.5分鐘),拿出來(lái)噴點(diǎn)酒精放到超凈工作臺里。

  2. 把上述細胞懸液吸到裝10ml培養基的15ml的離心管中(用培養基把凍存管洗一遍,把粘在壁上的細胞都洗下來(lái)),1000轉離心5分鐘。

  3. 把上清液倒掉,加1ml培養基把細胞懸浮起來(lái)。吸到裝有10ml培養基的10cm培養皿中前后左右輕輕搖動(dòng),使培養皿中的細胞均勻分布。

  4. 標好細胞種類(lèi)和日期、培養人名字等,放到CO2培養箱中培養,細胞貼壁后換培養基。

  5. 3天換一次培養基。

  二、 傳代

  1. 培養皿中的細胞覆蓋率達到80%-90%時(shí)要傳代。

  2. 把原有培養基吸掉。

  3. 加適當的胰蛋白酶(能覆蓋細胞就行),消化1-2分鐘。

  4. 細胞都變圓后加如入等體積的含血清的培養基終止消化。

  5. 用移液槍吹打細胞,把細胞都懸浮起來(lái)。

  6. 把細胞吸到15ml的離心管中,1000轉離心5分鐘。

  7. 倒掉上清液,加1-2ml培養基,把細胞都吹起來(lái)。

  8. 根據細胞種類(lèi)把細胞傳到幾個(gè)培養皿中。一般,癌細胞分5個(gè),正常細胞傳3個(gè)。繼續培養。

  三、 凍存把細胞消化下來(lái)并離心(同上)。用配好的凍存液把細胞懸浮起來(lái),分裝到滅菌的凍存管中,靜止幾分鐘,寫(xiě)明細胞種類(lèi),凍存日期。4℃ 30min,-20℃ 30min,-80℃過(guò)夜,然后放到液氮灌中保存。 凍存液的配制: 70%的*培養基+20%FBS+10%DMSO. DMSO要慢慢滴加,邊滴邊搖。

  細胞培養的步驟及注意事項,先和大家介紹到這,如果想要了解更多離心管的信息,可以關(guān)注天津本生生物,專(zhuān)用給生物醫藥客戶(hù)提供生物實(shí)驗室檢測耗材,歡迎廣大客戶(hù)來(lái)詢(xún)。

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