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| 甘油三酯(Triglyceride，TG)又稱(chēng)三酰甘油，是3分子長(cháng)鏈脂肪酸和甘油形成的脂肪分子，是人體內含量多的脂類(lèi)，大部分組織均可以利用甘油三酯分解產(chǎn)物供給能量，同時(shí)肝臟、脂肪等組織還可以進(jìn)行甘油三酯的合成，用酶學(xué)方法測定 TG 是生化檢測中的常用方法， 其特點(diǎn)是：1、靈敏度、準確度、精密度均高；2、使用溫和的反應條件；3、操作簡(jiǎn)便；4、適用于自動(dòng)分析儀。 本公司甘油三脂(TG)檢測試劑盒(GPO-PAP 單試劑微板法)又稱(chēng)磷酸甘油氧化酶法或磷酸甘油氧化酶-過(guò)氧化物酶偶聯(lián)法等，其原理是甘油三脂被 LPL 水解為甘油和脂肪酸，后者經(jīng)甘油激酶和 ATP 磷酸化，G-3-P 被磷酸甘油氧化酶(GPO)氧化并產(chǎn)生過(guò)氧化氫，再經(jīng)過(guò)氧化物酶(POD)催化，使 4-氨基安替比林與酚(三者合稱(chēng) PAP)反應，生成紅色benhun醌亞胺(Trinder 反應)，酶標儀在 500~520nm 處進(jìn)行比色測定，用于人或動(dòng)物的血清、血漿、腦脊液、細胞、組織等樣本中的甘油三脂含量定量測定。該試劑盒僅用于科研域，不適用于臨床診斷或其他用途。 |
| 名稱(chēng) | 規格 | 儲存 | |
| 試劑(A): GPO-PAP工作液 | Good's Buffer | 30mL | -20℃ 避光 |
| LPL、GK、GPO | |||
| 過(guò)氧化物酶(POD) | |||
| 4-氨基安替比林 | |||
| 對氯酚 | |||
| 試劑(B): Glycerol 標準(1.7mmol/L) | 1mL | 4℃ 避光 | |
| 試劑(C): ddH2O | 1mL | RT | |
| 1、生理鹽水或PBS。 |
| 2、96 孔板或離心管、小試管。 |
| 3、水浴鍋或恒溫箱。 |
| 4、酶標儀或分光光度計。 |
| 5、全自動(dòng)或半自動(dòng)生化分析儀。 |
| 一、樣本處理 | |||
| 1、血清、血漿、腦脊液樣本：從待測樣本中分離出的血清或血漿不應有溶血，直接檢測，如超過(guò)線(xiàn)性范圍，用生理鹽水稀釋后檢測。 | |||
| 2、細胞樣本 | |||
| a:取適量的細胞(一般推薦＞106以上)，1000g離心10min，棄上清，留取沉淀。 | |||
| b:.用 PBS 或生理鹽水清洗 1-2 次，1000g離心10min，棄上清，留取沉淀。 | |||
| c:加入200-300μl 的PBS或生理鹽水勻漿，冰浴條件下超聲破碎細胞，功率300W，每次3-5s，間隔30s,重復3-5次；亦可手動(dòng)勻漿，制備好的勻漿液不可離心；亦可用1-2% Triton X-100 冰浴 30-60min，制備好的裂解液不可離心。 | |||
| 3、組織樣本：準確稱(chēng)取適量組織樣本，按質(zhì)量(g)：生理鹽水或PBS(mL)=1：9的比例，加入生理鹽水或PBS，冰浴條件下手動(dòng)或機械勻漿，2500-3000g 離心10min，取上清待用。 | |||
| 二、酶標儀TG測定操作: | |||
| 1：按下表依次加入試劑： | |||
| 加入物(μL) | 空白孔 | 標準孔 | 待測孔 |
| ddH2O | 3 | - | - |
| Glycerol 標準(1.7mmol/L) | - | 3 | - |
| 待測樣本 | - | - | 3 |
| GPO-PAP 工作液 | 300 | 300 | 300 |
| 2：充分混勻, 37℃水浴中孵育5min。 | |||
| 3：酶標儀測定 500-520nm 吸光度，以空白孔調零，讀取標準孔和各待測孔的吸光度。 | |||
| 三、分光光度計(1ml 比色杯)、半自動(dòng)生化分析儀 TG 測定操作： | |||
| 1、按下表依次加入試劑： | |||
| 加入物(mL) | 空白管 | 標準管 | 待測管 |
| ddH2O | 0.01 | - | - |
| Glycerol 標準(1.7mmol/L) | - | 0.01 | - |
| 待測樣本 | - | - | 0.01 |
| GPO-PAP 工作液 | 1 | 1 | 1 |
| 2、充分混勻, 37℃水浴中孵育5min。 | |||
| 3、分光光度計測定500-520nm吸光度，空白管調零，讀取標準管和各待測管的吸光度。 | |||
| 四、普通分光光度計(2mL比色杯)TG 測定操作: | |||
| 1、按下表依次加入試劑： | |||
| 加入物(mL) | 空白管 | 標準管 | 待測管 |
| ddH2O | 0.02 | - | - |
| Glycerol 標準(1.7mmol/L) | - | 0.02 | - |
| 待測樣本 | - | - | 0.02 |
| GPO-PAP 工作液 | 2 | 2 | 2 |
| 2、充分混勻, 37℃水浴中孵育5min。 | |||
| 3、分光光度計測定500-520nm吸光度，空白管調零，讀取標準管和各待測管的吸光度。 | |||
| 五、全自動(dòng)生化分析儀 TG 測定操作: | |||
| 1、按下表依次加入試劑： | |||
| 加入物((μL) | 空白管 | 標準管 | 待測管 |
| ddH2O | 3 | - | - |
| Glycerol 標準(1.7mmol/L) | - | 3 | - |
| 待測樣本 | - | - | 3 |
| GPO-PAP 工作液 | 300 | 300 | 300 |
| 2、充分混勻, 37℃水浴中孵育5min。 | |||
| 3、全自動(dòng)生化分析儀測定 500-520nm 波長(cháng)處吸光度，以空白管調零，讀取標準管和各待測管的吸光度。 | |||
| 主波長(cháng)/次波長(cháng) | 500/600nm |
| 反應類(lèi)型 | 終點(diǎn)法 |
| 反應方向 | 升反應(+) |
| 血清、血漿等液體樣本(空白調零)： |
| TG(mmol/L)=｛(待測管吸光度-空白吸光度)/(標準管吸光度-空白吸光度)｝×1.7mmol/L |
| 血清、血漿等液體樣本(全自動(dòng)生化分析儀)： |
| TGmmol/L)=(待測管吸光度/(標準管吸光度)×1.7mmol/L |
| 細胞、組織等樣本(空白調零)： |
| TG(mmol/L)=｛ ( 待 測 管 吸 光 度 - 空 白 吸 光 度 )/( 標 準 管 吸 光 度 -空 白 吸 光 度 ) ｝×1.7mmol/L÷待測樣本濃度(mg/mL) |
| 細胞、組織等樣本(全自動(dòng)生化分析儀)： |
| TG(mmol/L)=(待測管吸光度/(標準管吸光度)×1.7mmol/L÷待測樣本濃度(mg/mL) |
| 健康成年人： |
| 理想范圍：＜1.7mmol/L(＜150mg/dl) |
| 邊緣升高：＜1.7-2.25mmol/L(150-199mg/dl) |
| 升高：＜2.26-5.64mmol/L(200-499mg/dl) |
| 很高：≥565mmol/L(≥500mg/dl) |
| 外觀(guān) | 無(wú)色至淡黃色澄清液體 |
| 線(xiàn)性范圍 | 0.05-9.0mmol/L(4~790mg/dl)，R2>0.98 |
| 靈敏度 | 檢測下限 0.05mmol/L(4mg/dl) |
| 變異系數 | 批內<5%，批間<8%，總誤差<10% |
| 空白吸光值 | <0.2(1cm 光徑) |
| 干擾因素 | 膽紅素<205μmol/L；血紅蛋白<6g/L；EDTA、肝素抗凝時(shí)，對結果無(wú)明顯影響。 |
| 穩定性 | 密閉，6個(gè)月 |
| 1、上述低溫試劑避免反復凍融，以免失效或效率下降。 |
| 2、本法可直接用于檢測腦脊液中的TG含量，但不能直接檢測尿液中的TG含量，因為未經(jīng)處理的尿液中含有還原性物質(zhì)，影響過(guò)氧化物酶反應。 |
| 3、待測樣本如不能及時(shí)測定，應置于2-8℃保存，3天內穩定。 |
| 4、本法線(xiàn)性范圍可達9.0mmol/L，如果樣本TG濃度過(guò)高，結果可能呈假性降低，應用生理鹽水稀釋后重測，結果乘以稀釋倍數。 |
| 有效期： | -20℃ 避光， 6個(gè)月有效。 |
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